提出抗體特異性驗(yàn)證策略

在一項(xiàng)新的研究中，抗體驗(yàn)證工作小組（International Working Group on Antibody Validation, IWGAV），即一個(gè)由在蛋白生物學(xué)領(lǐng)域有著不同研究興趣的科學(xué)家組成的獨(dú)立小組于2016年9月5日宣布在Nature Methods期刊上在線公布了他們開發(fā)出的初步策略來解決抗體特異性、功能性和可重復(fù)性方面至關(guān)重要的未被滿足的需求。IWGAV旨在為抗體制造者和使用者進(jìn)行抗體驗(yàn)證而提出策略建議。

盡管抗體在科學(xué)研究中是zui為頻繁使用的工具之一，但是還沒有一種綜合的科學(xué)框架用于驗(yàn)證不同研究應(yīng)用中的抗體特異性。由于失敗的或不可靠的實(shí)驗(yàn)，據(jù)估計(jì)，僅僅在美國，對(duì)未得到充分描述的抗體的使用花費(fèi)了3.5億美元，而在*，花費(fèi)了8億美元。

論文通信作者、IWGAV主席、瑞典*理工學(xué)院微生物學(xué)教授Mathias Uhlén博士說，“這次公布是開發(fā)被廣泛接受的用于驗(yàn)證抗體和確保適合于生物醫(yī)學(xué)研究的高質(zhì)量的始終如一的抗體的標(biāo)準(zhǔn)方面邁出的重要的*步。我們期待接受來自更廣泛的抗體用戶、發(fā)行者、資助機(jī)構(gòu)和制造者的反饋以便有助強(qiáng)化這種初始提出的策略和確保這些必需的生物醫(yī)學(xué)研究工具的可靠性。”

IWGAV鑒定出5個(gè)“概念支柱（conceptual pillar）”來指導(dǎo)在特定研究應(yīng)用中的抗體驗(yàn)證：
（1）基因策略：測(cè)量對(duì)照細(xì)胞或組織中的相關(guān)信號(hào)，其中在對(duì)照細(xì)胞或組織中，利用CRISPR/Cas或RNAi等技術(shù)對(duì)靶基因進(jìn)行敲除（knock out）或敲降（knock down，即降低靶基因表達(dá)）。

（2）正交策略：在多種樣品中使用一種與抗體無關(guān)的定量方法，然后研究基于抗體的定量方法與抗體無關(guān)的定量方法之間的關(guān)聯(lián)性。

（3）獨(dú)立抗體策略：使用兩種或以上識(shí)別靶蛋白上不同抗原決定簇的抗體，然后通過比較性的和定量的分析來證實(shí)抗體特異性。

（4）標(biāo)記蛋白表達(dá)：對(duì)內(nèi)源性靶基因進(jìn)行修飾，加入一個(gè)親和標(biāo)簽或一種熒光蛋白。來自標(biāo)記蛋白的信號(hào)能夠與基于抗體的方法的檢測(cè)結(jié)果相關(guān)聯(lián)。

（5）免疫免疫捕獲后進(jìn)行質(zhì)譜分析：偶聯(lián)免疫捕獲，即通過與一種靶蛋白特異性的抗體的結(jié)合從溶液中分離出靶蛋白，然后通過質(zhì)譜分析鑒定出與這種抗體直接相互作用的蛋白，以及可能與靶蛋白形成復(fù)合物的蛋白。

盡管上述的每個(gè)概念支柱都可能提供抗體特異性的證據(jù)，但是IWGAV推薦使用多個(gè)概念支柱來聲稱一種特定的抗體在一種特定的應(yīng)用中得到很好地驗(yàn)證。這項(xiàng)新的研究也包括建議抗體制造者和使用者在一段時(shí)間后確保抗體的可重復(fù)性。

這種初步提出的策略旨在提供一種用于抗體驗(yàn)證的科學(xué)基礎(chǔ)，和提供鼓勵(lì)廣泛地采用關(guān)于抗體使用的綜合指導(dǎo)方針的可重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)。然而，這將需要來自研究人員和抗體制造者的持續(xù)反饋。這些利益相關(guān)者將無一不在采用和執(zhí)行這種初步提出的策略中發(fā)揮著重要的作用。